線粒體染色試劑盒的分離原理
更新時(shí)間:2019-05-28 點(diǎn)擊次數(shù):1493
線粒體染色試劑盒用于動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合用于動(dòng)物軟組織和硬組織及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組織學(xué)研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到既用性能穩(wěn)定。
核線粒體的分離原理:
1.通過機(jī)械方法破裂細(xì)胞。
2.通過低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞。
3.通過高速差速離心獲得線粒體。
使用注意事項(xiàng):
1.全程低溫操作,將樣品管放在冰水浴而不是碎冰中。
2.快速、微量制備比大規(guī)模制備操作更方便快捷,因而更容易獲得完整的線粒體。
3.在不破壞亞細(xì)胞器的情況下、破碎細(xì)胞是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃均漿時(shí)較難破壁,因而要選小容量、玻璃均漿器,間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。在相差顯微鏡下檢查未裂解細(xì)胞應(yīng)在50%左右。研磨過度將破壞線粒體。研磨不足會(huì)降低得率。
4.離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同離心機(jī)可依據(jù)此計(jì)算離心速度。
5.進(jìn)行WesternBlot和2D-膠電泳,可直接加入樣品緩沖液裂解線粒體。
線粒體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的線粒體,使之帶紅色熒光(Ex/Em=640/659nm)(Cy5filter)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物,屬線粒體選擇性染料,該染料能輕易進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi),通過線粒體膜電位變化滲透進(jìn)入線粒體,并在線粒體中富集。線粒體染色試劑盒提供了標(biāo)記線粒體的全套試劑,能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇,既可單獨(dú)使用,也支持對細(xì)胞的多重?zé)晒夥治?。這種的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時(shí)間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動(dòng)提供了一種十分有效的方法。