使用CCK-8要注意的事項(xiàng)有哪些
更新時(shí)間:2021-10-25 點(diǎn)擊次數(shù):1615
CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)CCK8)試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。相信做細(xì)胞的同學(xué)對(duì)他都很熟悉,你確定你使用CCK-8試劑的方式是*正確的嗎?
1.酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
2.CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌,但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染,以免影響結(jié)果。
3.當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā),由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下,最外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測(cè)定孔用。
4.在培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),還應(yīng)考慮藥物的吸收,可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。
5.金屬對(duì)CCK8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%、15%、90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話(huà),將會(huì)100%抑制。
6.懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。